一、概要
磺胺二甲嘧啶（SM2）是应用广泛的抗菌素，曾对畜禽疾病控制和治疗起到了重要作用。但由于磺胺二甲嘧啶存在严重副作用，人体中长期存在磺胺会导致许多细菌对磺胺药产生抗药性，且有潜在的致癌性， ELISA方法具有灵敏度高，特异性强，仪器化程度低和样本前处理相对简单等优点，适于现场监控和大量样本筛查。
二、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物磺胺二甲嘧啶与微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗磺胺二甲嘧啶抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物磺胺二甲嘧啶的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出残留物磺胺二甲嘧啶的含量。
三、使用范围
用于定量、定性检测猪和鸡组织（肌肉、肝脏）、虾、鸡蛋、蜂蜜中磺胺二甲嘧啶的残留量。
四、交叉反应率
磺胺二甲嘧啶（SM2）………………100.0%
磺胺对甲氧嘧啶（SMD）…………… 10.0%
磺胺甲基嘧啶（SM1）……………… 5.0%
磺胺间甲氧嘧啶（SMM）…………… 0.8%
磺胺喹恶啉（SQX）………………… 1.1%
磺胺甲氧哒嗪（SMP）……………… 1.4%
磺胺甲恶唑（SMZ）………………… 0.1%
磺胺嘧啶（SD）…………………… 0.6%
磺胺间二甲氧嘧啶（SDM）…………0.1%
五、试剂盒组成
1．96孔酶标板1块（包被有偶联抗原）
2．标准液6瓶： 0µg/L, 1µg/L，3µg/L, 9µg/L, 27µg/L, 81µg/L
3．酶标记物12mL ………………………红色帽
4．抗体 7mL ……………………………绿色帽
5．显色液 A液 7mL ……………………白色帽
6．显色液 B液 7mL ……………………红色帽
7．终止液 7mL ……………………黄色帽
8．20X浓缩洗涤液 40mL………………透明帽
9．2X浓缩复溶液 50mL…………………透明帽
六、所用仪器、试剂
1．仪器：
微孔板酶标仪（配备450nm和630nm滤光片）
旋转蒸发仪
匀浆器
微量振荡器
离心机，转速应满足3000g
微量移液器：单道20µl、50µl、100µl、1000µl，多道250µl
天平：感量0.01g
氮气吹干装置
2．材料：
（以下所有试剂，均为分析纯）
乙腈
乙酸乙酯
异辛烷(或正己烷)
七、溶液的配制
1. 稀释复溶液：将2X浓缩复溶液摇匀，用水以1：2比例稀释，临用前配制。
2. 稀释洗涤液：将20X浓缩洗涤液摇匀，用水以1：20比例稀释，临用前配制。
八、样本前处理步骤
猪和鸡组织（肌肉、肝脏等）前处理步骤
1．取适量组织，用匀浆机10000r/min匀浆1 min，称取5±0.05g匀浆物置离心管中，加入15mL乙腈水溶液（84 v +16 v）混合，剧烈振荡10min。于15℃，3000g以上速度离心10min。
2．取3mL上清液，加入2mL水和5mL乙酸乙酯，混合振荡10min，15℃，3000g以上速度离心5min。
3．将上层液移另一管中用氮气吹干（或鸡心瓶中，50℃减压蒸干）
4．用1mL稀释后复溶液溶解干燥的残留物，加入异辛烷1mL振荡2min。15℃，3000g，离心5min，除去上层液
5．取50uL水相进行分析。
鸡蛋和虾样本处理方法同猪和鸡的组织样本处理方法。
蜂蜜样本处理方法
1 取1g蜂蜜，放入离心管中，用2mL稀释好的复溶液溶解；
2 加入8mL乙酸乙酯上下剧烈震荡10min；
3 室温3000g以上速度离心10min；
4 移取1mL上层乙酸乙酯（相当于0.1g样品）到另一离心管中，50~60℃氮气流下蒸干；
5 残留物用稀释后的0.5mL复溶液溶解；
6 取50 µL水相进行分析。
九、检测步骤：
1．将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20~24℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2．按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔密封放入自封袋，保存于2~8℃。
3．编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做2孔。
4．每孔加标准品或样本 50μL，然后加抗体工作液50 μL，用盖板膜盖板，37℃环境中反应30min。
5．取出酶标板甩出空内液体后用洗涤液按每孔250μL ,洗板4~5次，每次浸
泡10s，用吸水纸拍干。
6．加酶标二抗工作液，每孔100μL，用盖板膜盖板后置37℃环境中反应30min。取出按6操作。
7．显色：每孔加入显色剂A液50μL，再加B液50μL，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色15min。
8．测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测定吸光度值（OD值）。
十、结果判定
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含磺胺量成负相关。
1、定性测定
用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(µg/L)。假设样品1的吸光度值为0.211, 样品2的吸光度值为0.785, 标准液吸光度值分别是：0µg/L为2.100；1µg/L为1.580；3µg/L为1.010；9µg/L为0.580； 27µg/L为0.308； 81µg/L为0.120。则样品1的浓度范围是27 ~81µg/L; 样品2的浓度范围是3 ~9µg/L。
2、定量测定
所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值
以标准品百分吸光率为纵坐标，以磺胺二甲嘧啶标准品浓度的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中磺胺二甲嘧啶实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。
十一、检测方法的灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度：0.7µg/L，标准曲线IC50在1.4~3.8µg/L范围之内；
试剂盒的变异系数：均小于25% 。
试剂盒准确度：样本回收率均在55.0~120.0%之间。
样本最低检测限：
鸡肉……………………1.1µg/kg
鸡肝……………………1.4µg/kg
猪肉……………………1.3µg/kg
猪肝……………………1.5µg/kg
蜂蜜……………………1.6µg/kg
虾 ……………………1.4µg/kg
鸡蛋……………………1.5µg/kg
十二、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及标本没有回到室温（20~24℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、试剂混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2~8℃，不要冷冻; 将不用的微孔板放进自封袋重新密封; 标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。
0标准的吸光度值小于0.6时，表示试剂可能变质。
十三、储存条件和保质期
储存条件：保存试剂盒于2~8℃。
保存期：该产品保存期为6个月。
十四、供应商名称和地址
供应商：北京望尔生物技术有限公司
地址： 北京市海淀区圆明园西路2号
