一、概要
磺胺喹噁啉（SuLfaquinoxaLine SQX）属磺胺类抗生素兼有抗球虫作用，广泛用于养禽业，其口服后吸收迅速，但排泄缓慢，残留在组织器官及鸡蛋中时间长，人食用后，对人体产生耐药性等副作用。为保证产品的安全及对外贸易畅通，加强对动物性食品中磺胺喹噁啉的残留检测是非常必要的。
ELISA方法具有灵敏度高，特异性强，仪器化程度低和样本前处理相对简单等优点，适于现场监控和大量样本筛查。
二、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物磺胺喹噁啉将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争磺胺喹噁啉抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物磺胺喹噁啉的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物磺胺喹噁啉的含量。
三、使用范围：
用于猪或鸡组织（肌肉、肝脏等）、血清、尿液等样本中磺胺喹噁啉的残留检测。
四、交叉反应率
磺胺喹噁啉 ……………………………100％
磺胺二甲基嘧啶…………………………3.2％
磺胺甲基嘧啶……………………………1.1％
磺胺甲氧哒嗪……………………………3.4％
磺胺甲噁唑…………………………… 0.9％
磺胺间甲氧嘧啶…………………………0.8％
磺胺噻唑…………………………………0.5％
五、试剂盒组成
每一个盒中的试剂足够进行96个测量（包括标准分析孔），盒中的材料如下：
1. 磺胺喹噁啉96孔酶标板 1块
2. 标准液6瓶，1mL/瓶，为SQX标准溶液：0µg/L， 1µg/L ，3µg/L， 9µg/L，27µg/L，81µg/L。
3. 酶标记物7mL…………………………………………………… 红色帽
4. 磺胺喹噁啉抗体工作液10mL …………………………………绿色帽
5. 显色液 A液 7mL …………………………………………………白色帽
6. 显色液 B液 7mL…………………………………………………红色帽
7. 终止液（7mL）……………………………………………………黄色帽
8. 20X浓缩洗涤液40mL
9. 20X浓缩提取液50mL
六、所用试剂、仪器
1. 仪器
微孔板酶标仪450nm/630nm
旋转蒸发仪
组织均质器
振荡器
离心机
微量加样器20µL-200µL
微量加样器100µL-1000µL
2. 试剂
乙腈
乙酸乙酯
正己烷
蒸馏水
七、溶液配制
1. 2M 氯化钠溶液：称取11.69gNaCl 加入100ml水溶解。
2. 0.02 M PB缓冲液：Na2HPO4·12H2O 2.58g
Na2HPO4·2H2O 0.44g
加入500ml水溶解。
3. 稀释提取液：将20X浓缩提取液摇匀，用水以1：20的比例稀释，临用前配制。
4. 稀释洗涤液：将20X浓缩洗涤液摇匀，用水以1：20的比例稀释，临用前配制。
八、样本前处理步骤
1. 猪或鸡组织（肌肉、肝脏等）样本处理方法
1.1. 取适量组织，用匀浆机10000r/min匀浆1 min，称取（3±0.1）g匀浆物置离心管中，加入9mL乙腈-水溶液（84+16，v/v）混合，剧烈振荡10min。于15℃， 3000g以上速度离心10min；
1.2 取4mL上清液，加入2M氯化钠溶液2mL和7mL乙酸乙酯，混合振荡10min，15℃3000g以上速度离心5min；
1.3 将上层液移另到离心管中用氮气吹干；（或鸡心瓶中，50℃减压蒸干）
1.4 加入正己烷1mL振荡1min，再用稀释了的提取液1mL混合2min。15℃，3000g，离心5min，除去上层液；
1.5 取20uL下层相进行分析。
2. 血清样本处理方法
2.1 将加有抗凝血剂的血样本，于10℃，3000g以上离心10min。分离出血清。或过滤血清；
2.2 取1mL血清，加入3mL 稀释了的提取液，混合；
2.3 取20μL进行分析。
3. 尿液样本处理方法
3.1 将尿样本于10℃，3000g以上离心10 min。
3.2 取1mL澄清的尿样，加入3mL稀释了的提取液，混合；
3.3 取20μL进行分析。
九、检测步骤
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20~24℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔放入自封袋，保存于2~8℃。
3、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做2
孔。
4、反应：往酶标板微孔中加标准溶液或试样溶液20 µL，加入酶标记物50 µL，再加入SQX单克隆抗体80µL，用盖板膜封板，20~25℃恒温箱中反应1h。倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，去除孔中液体。每孔加入250µL洗涤液，15秒后倒出孔中液体，用吸水纸拍干，如此重复操作共洗板5次。
5、显色：每孔加入A、B底物液各50µL，轻轻振荡混匀，20~25℃恒温箱避光显色30min。
6、测定：每孔加入终止液50µL，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测定每孔吸光度值（OD值）。
十、结果判定
结果判定：有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含磺胺喹噁啉量成负相关。
1、用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围。假设样品1的吸光度值为0.211, 样品2的吸光度值为0.785, 标准液吸光度值分别是：0µg/L为2.100；1µg/L为1.580；3µg/L为1.010；9µg/L为0.580； 27µg/L为0.308； 81µg/L为0.120。则样品1的浓度范围是27-81µg/L; 样品2的浓度范围是3 -9µg/L。
2、所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值
以磺胺喹噁啉浓度的自然对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法，计算出样本溶液浓度。
若利用计算机专业软件，更便于大量样品的快速、准确分析。
十一、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度： 1μg/L，标准曲线IC50的范围在1.67~3.29μg/L之间。
试剂盒变异系数：小于25%。
准确度：样本的回收率范围在60.0％~110.0％之间。
样本最低检测限
猪肉………………………………………1.5µg/kg
猪肝………………………………………1.6µg/kg
血清………………………………………4.7µg/L
尿液………………………………………4.8µg/L
十二、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20~24℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象，所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、混合要均匀，洗板要彻底，否则会出现重复性不好的现象。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、试剂盒于2~8℃保存，不要冷冻；将不用的微孔板放进自封袋重新密封；由于标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。
8、标准的吸光度值小于0.6时，表示试剂可能变质。
十三、储存条件及保存期
贮藏条件：试剂盒于2~8℃保存，不要冷冻。
保存期：该产品保存期为6个月。
十四、供应商名称、地址
供应商：北京望尔生物技术有限公司
地址：北京市海淀区圆明园西路2号
