一、概要
莱克多巴胺（Ractopamine）属于β-兴奋剂。 β-兴奋剂是营养重分配剂一种，是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物，它可以加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率。在欧盟β-兴奋剂已被禁止用于家禽的生长促进剂，我国在《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中也有明文规定。但由于莱克多巴胺属于非处方药，且价格远低于克仑特罗，因此其非法应用者不断增多。本试剂盒为莱克多巴胺单克隆抗体酶联免疫快速检测试剂盒，可用于尿样、猪组织（肌肉、肝脏等）中的残留检测。
二、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测样本中的莱克多巴胺，在微孔条上预包被上偶联抗原，样本中的莱克多巴胺将和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含莱克多巴胺量成负相关，与标准曲线比较即可得出莱克多巴胺含量。
三、使用范围
用于定量、定性检测尿样、猪组织（肌肉、肝脏等）中莱克多巴胺的残留量。
四、交叉反应率
莱克多巴胺 …………………………100％
多巴酚丁胺 …………………………20％
盐酸多巴胺 …………………………3.4％
克伦特罗…………………………小于1％
沙丁胺醇…………………………小于1％
五、试剂盒的组成
每个试剂盒中的试剂足够进行96个测量（包括标准分析孔），试剂盒中的材料如下：
1、莱克多巴胺96孔板酶标板 1块
2、标准液 6瓶，为莱克多巴胺标准溶液： 0µg/L， 0. 5µg/L，1.5µg/L，4.5µg/L，13.5µg/L，40.5µg/L
3、酶标记物12mL …………………………………红色帽
4、浓缩抗体0.8mL …………………………………蓝色帽
5、底物液 A液 7mL ………………………………白色帽
6、底物液 B液 7mL ………………………………红色帽
7、终止液 7mL ………………………………黄色帽
8、20倍浓缩洗涤液 40mL
9、5倍浓缩复溶液50mL
六、所用仪器、试剂
1. 仪器：
微孔板酶标仪450nm/630nm
旋转蒸发仪
组织均质器、振荡器
离心机
20µL-200µL微量加样器、100µL-1000µL微量加样器
2. 试剂：
甲醇
乙醇
二氯甲烷
乙酸乙酯
丙酮
异丁醇
无水Na2SO4
七、溶液的配制
1. 1M NaOH：称NaOH 4g，用去离子水100mL溶解。
2. 稀释复溶液：将5X浓缩提取液摇匀，用去离子水以1：5比例稀释，临用前配制。
3. 稀释洗涤液：将20X浓缩洗涤液摇匀，用去离子水以1：20比例稀释，临用前配制。
4. 抗体稀释液： 将抗体浓缩液摇匀，用稀释了的复溶液将抗体按1：11倍稀释(500mL复溶液+50uL抗体)，临用前配制。
八、样本前处理步骤
1. 尿样本处理方法
1.1 1mL尿样用1M NaOH调节PH至10~11后，加入1g无水Na2SO4，再用3mL乙酸乙酯-丙酮（3：1；V/V）振荡提取，3000g离心5min（或静置分层）；
1.2 取1.5mL有机相在氮气流下吹干；
1.3 用1mL 已稀释了的复溶液溶解；
1.4 取50mL进行分析。
2. 猪组织（肌肉、肝脏等）样本处理方法
2.1 取猪组织（肌肉、肝脏等）进行均质。
2.1 称取组织3g±0.1g ，先加入无水乙腈9mL，再加入2 g无水Na2SO4，充分振荡10min;
2.2 取上清液4mL，氮气流下吹干；
2.3 加入（buffer 1）1mL混合后，加入3mL异丁醇和1g无水Na2SO4，振荡萃取5min，3000g，离心5min，取出上层有机相，氮气流下吹干；
2.4用1mL 已稀释了的复溶液溶解。
肉样本取100mL提取液加100mL稀释后的复溶液稀释。
肝样本取50mL提取液加150mL稀释后的复溶液稀释。
2.5 取50mL进行分析。
九、检测步骤
使用前将试剂盒置于室温（20~24℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自封袋，保存于2~8℃不要冷冻。
1、取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2~8℃不要冷冻。
2、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做2孔。
3、用加样器每孔加标准品或样本50mL 后，每孔再加50mL稀释后的抗体溶液。
4、用盖板膜盖板后置于25℃环境反应60min。
5、小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液每孔250mL充分洗涤4~5次，每次间隔15~30s，用吸水纸拍干。
6、加酶标记物：每孔加入100mL。用盖板膜盖板后置25℃环境反应30min，取出重复洗板步骤。
7、显色：每孔加入底物液A液50mL，再加底物液B液50mL，轻轻振荡混匀25℃环境避光显色15~30min。
8、测定：每孔加入终止液50mL，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测定每孔OD值。
十、结果判定
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含莱克多巴胺量成负相关。
1. 用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围。假设样品1的吸光度值为0.301，样品2的吸光度值为0.812，标准品吸光度值分别是：0µg/L为1.500；0. 5µg/L为1.280；1.5µg/L为1.080；4.5µg/L为0.710； 13.5µg/L为0.405；40.5µg/L为0.250。则样品1的浓度范围是13.5-40.5µg/kg; 样品2的浓度范围是1.5 -4.5µg/kg。
2. 定量测定
所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值
以莱克多巴胺浓度的自然对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法，计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软件，更便于大量样品的快速分析。
十一、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度: 0.5µg/L，标准曲线IC50在1.9~3.2ug/L范围之内。
试剂盒变异系数：小于25%。
试剂盒准确度：回收率范围在60.0％~105.0％之间。
样本最低检测限：
尿液…………………………………… 1.1µg/L
猪肉…………………………………… 1.5µg/kg
猪肝…………………………………… 1.4µg/kg
十二、注意事项：
1、使用之前将所有试剂温度回升至室温20~24℃。
2、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃冰箱。
3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
5、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20~24℃）会导致所有标准的OD值偏低。
6、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。
7、试剂混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
8、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
9、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
10、保存试剂盒于2~8℃，不要冷冻；将不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
11、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.6，表示试剂可能变质。
十三、储存条件及保存期
储存条件：保存试剂盒于2~8℃。
保存期：该产品保存期为6个月。
十四、供应商名称、地址
供应商：北京望尔生物技术有限公司
地址：北京市海淀区圆明园西路2号
