一、试验原理
测定基础是抗原抗体反应。酶联板的微孔包被有羊抗兔IgG的抗体。反应时加标准溶液或样品溶液，酶结合物和兔抗链霉素特异性抗体于酶联板上，链霉素和酶结合物竞争结合链霉素特异性抗体并固定于酶联板上。加入底物溶液（四甲基联苯胺），结合到板上的酶结合物将底物转化为蓝色的产物。加酸终止反应后，颜色由蓝色转变为黄色。在450nm波长处测吸光度值，吸光度值与样品中的链霉素浓度成反比。
二、使用范围
用于检测牛奶中链霉素残留量。
三、交叉反应
链霉素 100%
双氢链霉素 100%
庆大霉素 <0.1％
卡那霉素 <0.1％
新霉素 <0.1％
西梭霉素 <0.1％
妥布霉素 <0.1％
丁胺卡那 <0.1％
四、使用单位需自备的设备和试剂
以下所有试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂；水为双蒸水。
酶标仪 (配备450nm滤光片)
漩涡振荡器和微孔板振荡器
微量移液器 单道20µl , 100µl , 1000µl, 八道 250µl
五、试剂盒提供的材料与试剂
96孔板 1块（12条× 8孔）
标准液 6瓶, 浓度分别为0µg/L, 0.4µg/L, 2µg/L, 6µg/L, 20µg/L, 80µg/L （1ml/瓶）
酶结合物浓缩液 1瓶（0.2mL）
抗体浓缩液 1瓶（0.2mL）
缓冲液 1瓶（25mL）
底物 1瓶（1.5mL）
底物缓冲液 1瓶（15mL）
终止液 1瓶（15mL）
盖板膜 1张
六、溶液的配制
1、稀释抗体溶液：将抗体浓缩液摇匀，用缓冲液10倍稀释抗体浓缩液，现用现配。
2、稀释酶结合物：将酶结合物浓缩液摇匀，用缓冲液10倍稀释酶结合物浓缩液，现用现配。
3、底物溶液的配制：用底物缓冲液10倍稀释底物浓缩液，根据需要的量现用现配，底物溶液变蓝禁止使用。
七、样品的前处理方法：
牛奶：新鲜牛奶或解冻牛奶50µL，加水950µL，1：20稀释，作样品液备用。
八、检测步骤：
1、剪开锡箔袋，按每个标准液和样品提取液2孔计算所需微孔板条的数量，插入框架。
2、各取系列标准液和样品液20µL分别加到其对应微孔中，每个标准和样品加双孔。
3、每孔加稀释好的酶结合物20µL。
4、每孔加稀释好的抗体100µL，在微孔板振荡器上彻底混匀，用封口膜封好，室温孵育30分钟。
5、倒出孔内液体，在吸水纸上拍打，使孔中没有残留的液体。使用多道移液器，每孔加水250µL，再倾倒干净。如此洗板，重复三次。
6、每孔加底物溶液100µL，室温避光孵育30分钟。
7 、每孔加终止液100µL，混匀。
8 、在450nm波长处测吸光度值。60分钟内读数。
九、结果判定：
所获得的标准和样品吸光度值(B)的平均值除以第一个标准(0标准)吸光度值(B0)的平均值再乘以100，即百分吸光度值。
标准或样品吸光度值(B)
0标准的吸光度值(B0)
B—为标准溶液或样品的平均吸光度值。
B0—为0浓度的标准溶液平均吸光度值。
以链霉素浓度(µg/L)的自然对数为X轴，百分吸光度值为Y轴，在坐标纸上绘制标准曲线。每个样品对应的链霉素浓度(µg/L)可以根据标准曲线上数值乘以稀释倍数计算。
十、检测方法灵敏度、准确度、精密度
1、灵敏度
本方法的检测限为30µg/L。
2、准确度
本方法在200µg/L 添加浓度水平上的回收率为60~120%。
3、精密度
本方法的批内变异系数CV£ 20%、批间变异系数CV£ 30%。
十一、注意事项
1、 试剂盒在使用前应提前取出，使微孔板及所有试剂回复至室温（18～30
℃），进行试验。不用的微孔板条，应立即放回原锡箔袋中，密封。放回2-8℃保存。
2、吸取标准液及样品20µL时，要尽量准确吸取，放到孔底中央。
3、0标准值的吸光度值应大于0.6。
4、稀释后的抗体、酶结合物不稳定，不易保存，因此一定要现用现配。底
物应避光保存。
5、洗板时，吸头不要碰到酶联板中液体。
十二、储存条件和保存期
储存条件：试剂盒于2～8℃保存，不要冷冻。
保存期：该产品保存期为6个月。
十三、供应商名称、地址
供应商：中国兽医药品监察所
地址 ：北京市中关村南大街8号，100081
