一、概要
本试剂盒是应用酶联免疫技术研发的新一代药物残留检测产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点：操作时间仅需1.5小时，能最大限度地减少操作误差和工作强度。链霉素是氨基糖甙类抗生素，被广范应用于动物疾病的治疗，由于其具有神经毒性和肾脏毒性，在动物食品中的残留会影响人类健康，欧美国家及我国均要求其限量使用。目前，ELISA检测方法作为链霉素残留检测的筛选方法已被广泛使用。
二、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物链霉素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗链霉素抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物链霉素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物链霉素的含量。
三、使用范围
可用于牛奶、鸡组织（肌肉、肝脏等）、蜂蜜样本中链霉素的残留量检测。
四、交叉反应率
链霉素…………………………100.0%
硫酸链霉素……………………98.0%
双氢链霉素……………………105.0%
庆大霉素………………………<0.01%
卡那霉素………………………<0.01%
新霉素…………………………<0.01%
紫苏霉素………………………<0.01%
妥部布霉素……………………<0.01%
丁胺卡那霉素…………………<0.01%
五、试剂盒组成
每一个盒中的试剂足够进行96个孔测量（包括标准分析孔），盒中的材料如下：
1. 96孔板酶标板1块
2. 标准液6瓶，1mL/瓶，为STM标准溶液：0µg/L，0.5µg/L，1.5µg/L，4.5µg/L，13.5µg/L，40.5µg/L
3. 酶标记物12mL………………………………………红色帽
4. 链霉素抗体 7m L………………………………… 绿色帽
5. 显色液 A液 7mL …………………………………白色帽
6. 显色液 B液 7mL …………………………………红色帽
7. 终止液 7mL ……………………………………… 黄色帽
8. 浓缩洗涤液 40mL
9. 浓缩复溶液 50mL
六、所用试剂、仪器
1. 仪器
微孔板酶标仪450/630nm
振荡器
离心机
20µL-200µL、200µL-1000µL微量加样器
2. 试剂
蒸馏水
七、溶液的配制
1. 将浓缩复溶液用去离子水按1：5倍稀释
2. 稀释洗涤液：将20X浓缩洗涤液摇匀，用去离子水以1：20比例稀释，临用前配制。
3. PBST缓冲液配制 （提取用）
5.2g Na2HPO4·12H2O 0.88g NaH2PO4·2H2O
9g NaCl 1mL Tween-20 加去离水1000mL溶解
八、样本前处理步骤
1. 牛奶样本处理方法
取新鲜牛奶样本1mL，10℃，3000g以上离心10 min，去除上层飘浮的脂肪层，取下层20µL用样本复溶液780µL将其释液40倍，混匀后取出50µL即可进行分析。
2 鸡肉样本处理方法
2.1 2g去除脂肪的粉碎样品与8mLPBST缓冲液混合5min.加入正己烷5mL充分混合10min静置1h；
2.2 室温3000g离心15min；
2.3 用移液器取中间层1mL，加入1mL正己烷，充分振荡5min，3000g离心15min；
2.4 去除上层，取下层50µL，加入450µL复溶液；
2.5 取50µL水相进行分析。
3. 鸡肝脏样本处理方法
3.1 5.0g去除脂肪的粉碎样品与20mLPBST缓冲液混合30min；
3.2 室温3000g离心10min；
3.3 2mL上清与3mL正己烷混合振荡5min；
3.4 室温3000g离心10min；
3.5 去除上层脂肪层，取100µL下层液，加入900µL复溶液；
3.6 取50µL水相进行分析。
4. 蜂蜜样本处理方法
4.1 配制提取缓冲液：1g庚烷-磺酸钠盐， 1.5g Na2HPO4-12H2O，加入蒸馏水至100mL,用磷酸调PH=2.0。
4.2 处理程序：称量1g样品加入10mL提取缓冲液，振荡10min使完全溶解，室温3000g离心10 min，直至清亮。
4.3 用RIDA C18柱（纯化提取物）
4.3.1用2mL无水甲醇洗柱子。
4.3.2用2mL水洗柱子。
4.3.3上样，取2mL样本以流速为15d/min过柱。
4.3.4用3mL水洗柱子。
4.3.5用氮气或空气吹干柱子。
4.3.6用1mL无水甲醇洗脱样品，流速为15滴/min。
4.3.7在40—50℃,弱空气或氮气流下完全蒸发溶剂。
4.3.8用4mL PBS缓冲液溶解干燥的残留物，取50µL进行分析。
九、检测步骤
1. 将试剂盒从冷藏环境中取出，将所需试剂从试剂盒中取出，置室温（20~24℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2. 取出需要数量的已包被抗原的微孔板及框架，将不用的微孔板重新密封，保存于2~8℃，不要冷冻。
3. 编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做2孔。
4. 反应：往酶标板微孔中加标准溶液或试样溶液50 mL，然后加入链霉素单克隆抗体工作液50 mL，用盖板膜封板，37℃恒温箱中反应30min。倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，去除孔中液体。每孔加入250mL洗涤液，30秒后倒出孔中液体，用吸水纸拍干，如此重复操作共洗板5次。加入酶标记物100mL，用盖板膜封板，37℃恒温箱中反应30min。取出酶标板，如前述洗板5次。
5. 显色：每孔加入A、B底物液各50mL，轻轻振荡混匀，37℃恒温箱避光显色15min。
6. 测定：每孔加入终止液50mL，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测定每孔吸光度值（OD值）。
十、结果判定
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含链霉素量成负相关。
1. 用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围（µg/L）。假设样品1的吸光度值为0.6，样品2的吸光度值为1.0，标准液吸光度值分别是：0µg/L为1.500；0.5µg/L为1.380；1.5µg/L为1.200；4.5µg/L为0.900；13.5µg/L为0.700；40.5µg/L为0.400。则样品1的浓度范围是13.5µg/L~40.5µg/L；样品2的浓度范围是1.5µg/L~4.5µg/L。（从曲线上得出的结果需乘上稀释倍数，才得到样本中实际链霉素的含量）。
2. 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值
以标准品百分吸光率为纵坐标，以链霉素标准品浓度（µg/L）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中链霉素实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。
十一、检测方法灵敏度、准确度、精密度：
试剂盒灵敏度：0.34µg/L，标准曲线IC50在2.67µg/L ~3.59µg/L范围之内。
试剂盒精密度：变异系数小于25%。
准确度：样品的回收率范围在55.0%~120.0%之间。
样本最低检测限：
鸡肉………………………………2.8µg/kg
鸡肝………………………………2.5µg/kg
蜂蜜………………………………24.3µg/kg
牛奶………………………………18.4µg/kg
十二、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20~24℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象，所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、混合要均匀，洗板要彻底，否则会出现重复性不好的现象。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、试剂盒于2~8℃保存，不要冷冻；将不用的微孔板放进自封袋重新密封；由于标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。
8、标准的吸光度值小于0.6个单位（OD450nm<0.6）时，表示试剂可能变质。
9、加A、B 液后一般显色15min即可，若颜色较浅，可延长显色时间，但不能超过30min。
十三、贮藏条件及保存期
贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。
保存期：该产品保存期为6个月。
十四、供应商名称、地址
供应商：北京望尔生物技术有限公司
地址：北京市海淀区圆明园西路2号
